当前位置: 首页 > >

盐酸法舒地尔促进骨髓间充质干细胞修复全层皮肤缺损的实验探究

发布时间:

英文缩写 英文缩写 Abbreviation Full English Name Chinese MSCs mesenchymal stem cells 骨髓间充质干 细胞 磷酸盐缓冲液 表皮生长因子 细胞角蛋白 二氨基联苯胺 改良极限必需 培养基 胎牛血清 乙二胺四乙酸 高糖DMEM 苏木精和伊红 组织工程 盐酸法舒地尔 创面愈合指数 PBS EGF CK DAB phosphate—buffered saline epidermal growth factor Cytokeratin diamino benzidine dulbecco’S modified eagle’S medium DM匣M FBS EDTA fetal bovine serum Editic acid H.DⅣ【EM HE TE HAl077 hi曲glucose—DMEM hematoxylin and eosin 1 issue engmeerlng fasudil hydrochloride wound closured index WCI 7 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究生签名霖罾,磊导师签 研究生签名菸罾,徽导师签 毋年 学院领导签名: 弓月诞日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特易J)Jn以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名粼乏巍导师签名: 研究生签名采乏蟊导师签名: 08年乡月妙日 中文摘要 盐酸法舒地尔促进骨髓问充质千细胞修复全层皮肤 缺损的实验研究 摘 要 目的:观察骨髓间充质干细胞与Rho分子信号通路的阻 断剂盐酸法舒地尔(HAl 077)对全层皮肤缺损的修复作用。 方法:(1)兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、培养、 鉴定和向表皮细胞分化趋向的实验研究:抽取健康新西兰大 耳白兔骨髓,采用直接贴壁法(全骨髓培养法)培养骨髓间 充质干细胞,48h后首次更换培养基,弃去未贴壁的细胞, 每隔2—3天换液1次,接*融和时按l:2或l:3 I:h侈fJ传 代培养,留取第3—5代备用;采用免疫组织化学和流式细 胞仪对所培养细胞进行鉴定。扩增培养3代后以70%完全培 养基+30%成纤维细胞培养基上清液+10 ng/LEGF诱导分化, 倒置显微镜下观察细胞形态的变化,并于诱导后7d运用免 疫组织化学方法检测CKl9、131的表达。(2)HAl077与骨 髓间充质干细胞共同应用修复全层皮肤缺损的实验研究:① 将18只Wistar大鼠背部左右两侧各置备一直径为2cm的圆 形皮肤缺损,缺损深至皮下。随机分为六组每三只动物为一 组,将5种不同剂量的HAl077(每个创面0.5m1)应用于皮 肤缺损创面并设立一空白对照组,治疗后以创面面积的变化 及组织学改变评价愈合质量。②取新西兰大耳白兔12只, 随机分为六组:空白对照组(A组)、EGF对照组(B组)、 MSCs治疗组(C组)、诱导细胞治疗组(D组)、MSCs+ HAl077治疗组(E组)和诱导细胞+HAl077治疗组(F组)。 中文摘要 在背部脊柱两侧1cm处由前至后制备6个直径为3cm的圆 形皮肤缺损(每侧各3个),深至皮下。创面按分组要求注 射药品和细胞创面按分组要求注射药品:MSCs及诱导细胞 (诱导细胞为经诱导培养基诱导分化7天后所收集的细胞) 浓度均为2x106/ml,每个创面注射细胞悬液lml;HAl077 浓度根据前一实验结果选定,每一创面注射O.5ml。细胞悬 液及药品均直接注射至受试动物创面组织内。于伤后第3、7、 14d用透明膜覆盖创面,并计算创面愈合指数,计算各组* 均愈合时间。伤后3、7、14、21d按分组随机选择动物创面 取创面组织行常规组织学(髓染色)检查。统计分析:本 实验所有数据均以均数士标准差(页±s)表示,采用SPSS 统计分析软件进行方差分析及t检验。 结果:(1)全骨髓培养48h后可见部分散在圆形贴壁细 胞,5 d左右可见细胞集落,10 d后形成集落的数目、大小 明显增加,细胞逐渐融合成片,培养至14d左右时细胞融合 达80%--90%。传代后4h多数细胞贴壁变形,生长迅速,约 7 d左右达完全融合,即可继续传代。细胞化学检测本实验 分离、培养的细胞CD34(.)、CD44(+)、CDl05(+),可以 证明所培养的细胞为较纯的MSCs,流式细胞结果进一步证 实该结果。MSCs经诱导培养基诱导7d后可见细胞由原来的 长梭形成纤维细胞状结构逐渐变短,细胞紧密排列成片,并 可表达CKl9、pl等标志。(2)①大鼠各组创面面积随伤后 时间延长而逐渐缩小,其中以应用201xrnol/LHAl077组创面 缩小更为明显。②C、D、E、F四组在各检测时间点愈合指 数均明显大于A、B两组(P<O.05),其中E组、F组愈合指 数又明显大于其它两治疗组(P<O.05)。E组和F组的*均愈 中文摘要 合时间分别为17.25士1.29天和17.67士1.25也明显快于其他组 别(P<O.05),并且在皮肤愈合的病理结构上该两组也明显优 于其他各组。但C组与D组之间、E组与F组之间无论愈合 指数还是*均愈合时间均无显著性差异(P>O.05)。 结论:(1)应用本实验方法,可以分离、纯化培养兔骨 髓间充质干细胞,所培养的MSCs体外生长稳定、增殖速 度



友情链接: 简历 面试求职范文 职业规划 自我管理 社交礼仪 76242百科